ఇంటర్నేషనల్ జర్నల్ ఆఫ్ కార్డియోవాస్కులర్ రీసెర్చ్

బృహద్ధమని కవాట కాల్సిఫికేషన్ యొక్క ఇన్ విట్రో యానిమల్ మోడల్‌లను మెరుగుపరచడానికి Na3PO4ని ఉపయోగించడం

డేనియల్ అలెజాండ్రో లెర్మాన్, సాయి ప్రసాద్ మరియు నస్రీ అలోట్టి

బృహద్ధమని కవాట కాల్సిఫికేషన్ యొక్క ఇన్ విట్రో యానిమల్ మోడల్‌లను మెరుగుపరచడానికి Na ₃ PO _4ని ఉపయోగించడం

నేపధ్యం/ఉద్దేశాలు: కాల్సిఫిక్ బృహద్ధమని కవాట వ్యాధి (CAVD) యొక్క పాథోజెనిసిస్ నిర్దిష్ట ఆస్టియోజెనిక్ సిగ్నలింగ్ పాత్‌వేస్ మరియు అపోప్టోసిస్ యొక్క క్రియాశీలత ద్వారా వర్గీకరించబడిన వాల్యులర్ ఇంటర్‌స్టీషియల్ సెల్స్ (VICలు) యొక్క క్రియాశీల శోథ ప్రక్రియను కలిగి ఉంటుంది. ఈ ప్రక్రియను కొన్ని పరమాణు గుర్తులను మరియు ఆకస్మిక కాల్సిఫికేషన్ యొక్క జన్యు వ్యక్తీకరణ మార్గాలను విశ్లేషించడం ద్వారా అధ్యయనం చేయవచ్చు. సంభావ్య కాల్సిఫికేషన్ ఇన్హిబిటర్‌లను పరీక్షించడం కోసం విట్రో యానిమల్ మోడల్‌లలో మెరుగుపరిచే లక్ష్యంతో కాల్సిఫికేషన్ ప్రమోటర్‌గా సోడియం ఫాస్ఫేట్ (Na ₃ PO ₄ ) పాత్రను పరిశోధించడం మా అధ్యయనం యొక్క ఉద్దేశ్యం .

పదార్థాలు మరియు పద్ధతులు: సీరియల్ కొల్లాజినేస్ జీర్ణక్రియ ద్వారా 6 ఆరోగ్యకరమైన 6-నెలల తాజా పోర్సిన్ హృదయాల నుండి VICలు సంగ్రహించబడ్డాయి. VICల యొక్క ఆకస్మిక కాల్సిఫికేషన్ సమయంలో ఆసక్తి ఉన్న జన్యువుల బదిలీని లెక్కించడానికి క్వాంటిటేటివ్ పాలిమరేస్ చైన్ రియాక్షన్ (qPCR) ఉపయోగించబడింది. Na ₃ PO ₄ (3 mM, pH 7.4) జోడించడం ద్వారా VICల యొక్క ఆకస్మిక కాల్సిఫికేషన్ పెంచబడింది . కాల్షియం నిక్షేపణ కోసం అలిజారిన్ రెడ్ స్టెయినింగ్ మరియు కొల్లాజెన్ కోసం సిరియస్ రెడ్ స్టెయినింగ్ ద్వారా కాల్సిఫికేషన్ స్థాయిని అంచనా వేశారు. కాల్షియం మరియు కొల్లాజెన్ నిక్షేపణను పరిమాణాత్మకంగా నిర్ణయించడానికి కలర్మెట్రిక్ పద్ధతులు ఉపయోగించబడ్డాయి. అదనంగా, ఆల్కలీన్ ఫాస్ఫేటేస్ (ALP) యొక్క ఎంజైమాటిక్ చర్య గతిశాస్త్ర పరీక్ష ద్వారా కొలుస్తారు. గణాంక విశ్లేషణ కోసం మేము SPSS మరియు Microsoft Office Excel 2013ని ఉపయోగించాము.

ఫలితాలు: పోర్సిన్ VICలు కాల్షియం మరియు కొల్లాజెన్ నిక్షేపణతో ఆకస్మికంగా కాల్సిఫై అవుతాయి. ఈ అధ్యయనంలో మేము రోజు 0 నుండి 14వ రోజు వరకు కాల్షియం మరియు కొల్లాజెన్ నిక్షేపణ పెరుగుదలను గమనించాము (కాల్షియం: 376%; పి <0.001, కొల్లాజెన్: 3553%; పి <0.001). రోజు 14 నాటికి mRNA యొక్క qPCR విశ్లేషణ క్రింది ఫలితాలను చూపించింది: α-ఆక్టిన్, మైయోబ్లాస్ట్ ఫినోటైప్ యొక్క మార్కర్, 1.6 రెట్లు పెరిగింది; P<0.001. Runx2, ఒక ఆస్టియోబ్లాస్ట్ మార్కర్, 1.3 రెట్లు పెరిగింది; P <0.05, TGF-β, ఆస్టియోజెనిసిస్ యొక్క ప్రమోటర్, 3.2- రెట్లు పెరిగింది; P <0.001, మరియు RhoA, మయోబ్లాస్ట్‌లలో నాడ్యులర్ ఫార్మేషన్ రెగ్యులేటర్, 4.5 రెట్లు పెరిగింది; P<0.001, రోజు 0లో వాటి స్థాయిలతో పోలిస్తే. RANKL mRNA మరియు కాల్పోనిన్ గణనీయంగా మారలేదు. Na ₃ PO ₄ (3 mM, pH 7.4) తో పోర్సిన్ VICల చికిత్స 14వ రోజు నాటికి కాల్షియం నిక్షేపణలో గణనీయమైన పెరుగుదలకు దారితీసింది (522%; P<0.001), మరియు 7వ రోజు నాటికి ALP కార్యాచరణలో గణనీయమైన పెరుగుదల (228%; పి <0.05). 14వ రోజు నాటికి సమూహాల మధ్య ALP కార్యాచరణలో గణనీయమైన మార్పులు లేవు.

ముగింపు: ఈ అధ్యయనం కాల్షియం, కొల్లాజెన్ మరియు ALP కార్యాచరణ యొక్క క్రియాశీల పెరుగుదలతో బృహద్ధమని VICల యొక్క ఆకస్మిక కాల్సిఫికేషన్ సమయంలో కొన్ని నిర్దిష్ట అణువుల నియంత్రణను ప్రదర్శించింది. ఈ ఇన్ విట్రో మోడల్‌లో Na ₃ PO ₄ (3 mM, pH 7.4) తో సహజంగా VICల కాల్సిఫికేషన్‌ను పెంచడం సాధ్యమైంది, దీనిలో కాల్సిఫిక్ బృహద్ధమని సంబంధ స్టెనోసిస్‌కు వ్యతిరేకంగా ఒక నవల సంభావ్య చికిత్సా వ్యూహాన్ని గుర్తించడానికి కాల్సిఫికేషన్ యొక్క నిరోధకాలను పరీక్షించవచ్చు.